Главная страница

6. Сыворотки, флоккуляция.. Иммуноглобулины и иммунные сыворотки


Скачать 0.79 Mb.
НазваниеИммуноглобулины и иммунные сыворотки
Анкор6. Сыворотки, флоккуляция..doc
Дата26.09.2017
Размер0.79 Mb.
Формат файлаdoc
Имя файла6. Сыворотки, флоккуляция..doc
ТипДокументы
#8960
Каталогid3143511

С этим файлом связано 14 файл(ов). Среди них: Yuvenilny_dermatomiozit.pdf, Nespetsificheskiy_aortoarteriit.pdf, 3-ФР.doc, 6. Сыворотки, флоккуляция..doc, Malyshev_KOS_i_VEB.pdf, Meditsinskaya_reabilitatsia_v_sporte.pdf и ещё 4 файл(а).
Показать все связанные файлы

Иммуноглобулины и иммунные сыворотки.

При необходимости экстренного создания иммунитета, а также для лечения уже развивающейся инфекции используют сывороточные препараты - иммунные сыворотки и иммуноглобулины, действующим началом которых являются специфические антитела готовые антитела. Эти препараты обеспечивают развитие искусственного пассивного иммунитета, что определяет область их использования – профилактика и лечение инфекционных заболеваний.

Обычно сывороточные препараты вводят парентерально, что обуславливает быстрое развитие невосприимчивости, но оно длится не долго (около 2-3 нед).

Иммунные сыворотки получают или от иммунизированных животных (гетерологичные сыворотки), или переболевших, а также вакцинированных людей (гомологичные сыворотки).

1. Гетерологичные сыворотки готовят путем гипериммунизации чаще всего лошадей, т.е. путем многократного введения животным больших доз антигена по разработанной схеме. На пике антителообразования у иммунных животных забирают кровь, освобождают е от форменных элементов и фибрина, фильтруют и стандартизируют по концентрации антител (антитоксинов, агглютининов, вируснейтрализующих антител и т.д.), содержанию белка и другим свойствам. Полученная таким образом нативная иммунная сыворотка содержит много балластных белков, и имеют относительно низкую концентрацию антител. Поэтому из нее получают иммуноглобулины путем выделения, очистки и концентрирования их ферментативным способом в сочетании диализом (“Диаферм”), осаждением спиртом на холоде, хроматографией или иными способами. Предпочтительнее использование глобулиновых фракций, которые содержат не более 20% всех белков, содержащихся в сыворотке. Однако гетерологичные сыворотки иммуногены для человека. Иммуноглобулины содержат меньше балластного белка и имеют более высокую концентрацию антител.

2. Препараты иммуноглобулинов, полученные из человеческой крови, для человека не иммуногены и в этом их преимущество перед гетерологичными сыворотками и глобулинами.

Гомологичные сыворотки готовят из донорской или плацентарной крови, предварительно смешивают сыворотки, полученные из крови разных лиц, и поэтому концентрация в них антител невелика. Для получения препаратов иммуноглобулинов (гомологичных) с повышенным содержанием антител производят предварительный отбор сырья – используют сыворотки реконвалесцентов или доноров, подвергнутых иммунизации. Такие препараты чаще используют для групп риска: новорожденных, тяжелобольных и т.п.

Разработаны также методы получения активных фрагментов иммуноглобулинов, активных центров (детерминант) иммуноглобулинов (так называемые доменные иммуноглобулины). Их преимущество заключается в незначительно белковой нагрузке, более высоких специфичности и эффективности препаратов. Для получения гомологичных иммуноглобулинов и их фрагментов используют кровь иммунных (переболевших, вакцинированных) людей или специально вакцинированных доноров, а также плацентарную и абортную кровь.

Иммунные сыворотки, иммуноглобулины и их фрагменты подразделяются на:

1. Антитоксические - сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой гангрены, т.е. сыворотки, содержащие в качестве антител антитоксины, которые нейтрализуют специфические токсины.

2. Антибактериальные - сыворотки, содержащие агглютинины, преципитины, комплементсвязывающие и другие антитела к возбудителям таких болезней, как брюшной тиф, дизентерия, чума, коклюш и др.

3. Противовирусные - сыворотки (коревая, гриппозная, антирабическая и др.), содержащие вируснейтрализующие, комплементсвязывающие и другие противовирусные антитела.

Сывороточные препараты также можно разделить на:

1. Нормальные сыворотки – получают из крови нескольких тысяч доноров и используют для профилактики респираторных инфекций у детей, для профилактики гепатита А, эпидемического паротита, кори, ветряной оспы. Они содержат кроме специфичных антител и большое кол-во других иммуноглобулинов.

2. Иммунные сыворотки – содержат иммуноглобулины направленного действия (антистафилококковый, против синегнойной палочки). Их получают путем очистки от неспецифических антител.

В настоящее время используются:

1. Иммуноглобулины человека: противогриппозный, противококлюшный, противодифтерийный, противостолбнячный, против клещевого энцефалита, против ветряной оспы, против гепатита А, противостафилококковый, противоботулинические.

2. Гетерологичные сыворотки и иммуноглобулины: противодифтерийная, противостолбнячная, противоботулиническая А, В, Е, противогангренозные – лошадиные, антирабический иммуноглобулин, противосибиреязвенный иммуноглобулин, пролученные из сыворотки лошадей, иммуноглобулин против клещевого энцефалита.

Активность иммунных сывороточных препаратов выражают в единицах, определяемых в серологических реакциях нейтрализации, агглютинации, преципитации и т.д. Профилактическое и лечебное действие оценивают в опытах на экспериментальных животных (белые мыши, кролики, морские свинки). Например, активность антитоксических сывороток выражают в международных антитоксических единицах (МЕ): 1 МЕ — это количество антител, нейтрализующее определенное количество Dlm специфического токсина. Например, 1 МЕ противостолбнячной сыворотки — это количество антитоксина, нейтрализующее 100 Dlm токсина для белой мыши. Противостолбнячная сыворотка обычно содержит 3000 МЕ/мл.

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины создают пассивный специфический иммунитет практически сразу же после их введения. Этот иммунитет сохраняется при введении гомологичных сывороток до 1-1,5 мес и гетерологичных — до 10—20 сут (в организме чужеродные белки быстрее разрушаются). Иммунные сывороточные препараты вводят, как правило, внутримышечно в больших дозах и как можно раньше после вероятного инфицирования. Разработаны препараты и для внутривенного введения.

Осложнения иммунопрофилактики.

Чужеродные сыворотки и иммуноглобулины при введении людям могут вызывать осложнения в виде анафилактического шока или сывороточной болезни. При первом введении таких препаратов происходит сенсибилизация, а при повторном – развитие аллергических реакций немедленного типа.

Наиболее опасным осложнением является анафилактический шок - на фоне или сразу после введения лекарственного препарата появились слабость, головокружение, затруднение дыхания, чувство нехватки воздуха, беспокойство, чувство жара во всем теле, иногда рвота, кожа бледная, холодная влажная, дыхание частое, поверхностное, систолическое давление 90 мм рт. ст. или ниже. В тяжелых случаях угнетение создания и дыхания. А при отсутствии квалифицированной медицинской помощи через 5-30 мин может наступить летальный исход.

Срок развития сывороточной болезни после введения гетерологичной сыворотки зависит от времени и частоты введения препарата. Так, после первого введения симптомы болезни проявляются в среднем через 7-10 дней, а при повторном – через более короткий срок – от нескольких часов до 2-3 дней. Продолжительность болезни зависит от ее тяжести и составляет от нескольких дней до 2 недель.

Для профилактики анафилактического шока перед введением гетерологической сыворотки ставят внутрикожную пробу с разведенной 1:100 сывороткой лошади (ампула прилагается в наборе с сывороткой и маркирована красным цветом). Такую сыворотку вводят внутрикожно в сгибательную поверхность предплечья в объеме 0,1 мл. Учет результата проводят через 20 мин. Проба считается отрицательной, если диаметр отека (гиперемии) в месте инъекции, менее чем 1 см. Проба считается положительной, если диаметр отека 1 см и более.

При отрицательной кожной пробе неразведенную сыворотку (ампула маркирована синим цветом и входит в набор) вводят в объеме 0,1 мл подкожно в области средней трети плеча. При отсутствии местной и общей реакции через 30-60 мин внутримышечно вводят необходимую дозу сыворотки.

Если кожная проба положительная, а также при развитии реакции на подкожную инъекцию, препарат используют только при жизненной необходимости. Обязательны мероприятия по десенсибилизации – введение сыворотки по Безредке. Для этого сыворотку разведенную 1:100 вводят подкожно в объеме 0,5 мл, 2 мл, 5 мл с интервалом 15-20 мин, затем с такими же интервалами вводят подкожно 0,1 мл, и 1,0 мл неразведенной сыворотки. При отсутствии реакции вводят назначенную дозу сыворотки.

Одновременно с началом десенсибилизации начинают противошоковую терапию. Всегда наготове необходимо иметь раствор адреналина 1:1000 или 0,5% раствор эфедрина.
Реакции нейтрализации токсина антитоксином.

При диагностике некоторых инфекционных заболеваний, возбудители которых продуцируют экзотоксины, используют реакцию нейтрализации токсина антитоксином. Для ее проведения исследуемый материал, в котором подозревают наличие токсина, смешивают с соответствующей антитоксической сывороткой и после инкубации в термостате вводят лабораторным животным (белые мыши, морские свинки). Контрольным животным вводят только исследуемый материал. Если взятая в опыт антитоксическая сыворотка нейтрализует токсин, животные останутся живы. Контрольные животные гибнут под действием токсина. Реакция нейтрализации используется для выявления токсинов возбудителей ботулизма, столбняка, газовой гангрены.

Часто для определения активности иммунных антитоксических сывороток анатоксинов используется реакция нейтрализации по механизму флоккуляции.

Реакция флоккуляции.

В результате взаимодействия токсина или анатоксина с антитоксической сывороткой выпадают хлопья флоккулята. Наиболее интенсивная и ранняя («инициальная») флоккуляция происходит в пробирке, где антиген и антитело содержатся в эквивалентных соотношениях.

Реакцию ставят в два этапа.

1. По стандартной сыворотке устанавливают Lf (Limes flocculationis) в 1 мл токсина. Lf токсина определяется его количеством, которое дает «инициальную» флоккуляцию с международной единицей (МЕ) сыворотки. Установив силу токсина, приступают к определению силы сыворотки.

2. Известной силы токсин и испытуемую антитоксическую сыворотку разливают в пробирки в определенном объеме. Пробирки выдерживают на водяной бане при 45ºС в течение 30 мин до выпадения хлопьев в одной из них.

«Инициальная» флоккуляция проявляется в той пробирке, где количество токсина соответствует количеству международных единиц сыворотки. Например, если флоккуляция произошла в 3-й пробирке, значит в 0,4 мл сыворотки находится 40МЕ. Следовательно, 1 мл сыворотки содержит 40:0,4=100 МЕ.


Ингридиенты, мл

пробирки

1

2

3

4

5

6

7

Токсин, содержащий 20 Lf в 1 мл

0,2

0,2

0,2

0,2

0,2

0,2

0,2

Исследуемая сыворотка

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

-

0,6

Инкубация при 45ºС в течение 30 мин

Результаты по «инициальной» флоккуляции
























Аллергия.

Аллергия (от греч. allos - другой) – специфическая повышенная чувствительность к антигенам (аллергенам) в результате неадекватной реакции иммунной системы.

Аллергические реакции различаются по времени их появления после повторного контакта с аллергеном:

1) реакции гиперчувствительности немедленного типа (ГЧНТ) - развиваются через несколько минут

2)реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ) – развиваются через 6-10 ч и позднее.
По классификации Джелла и Кумбса все аллергические реакции в зависимости от механизмов развития разделяют на 4 типа.
Реакции гиперчувствительности I типа – анафилактический тип - обусловлены взаимодействием аллергена и IgE, сорбированным на мембранах тучных клеток и базофилов, что приводит высвобождению БАВ (гистамин, серотонин, эозинофильный и нейтрофильный хемотаксические факторы, протеазы). Эти медиаторы взаимодействуют с рецепторами мышечных клеток, секреторных и многих других клеток, что приводит к сокращению гладкой мускулатуры (напр., бронхов), повышению проницаемости сосудов и отеку.

Клинически реакции первого типа проявляются анафилаксией (системные реакции) и атопическими заболеваниями (местные реакции), реже острой крапивницей и ангионевротическим отеком. Главные формы: риниты, конъюнктивиты, бронхиальная астма, отек Квинке.

Анафилактические реакции специфичны и развиваются после попадания аллергена, к которому организм был предварительно сенсибилизирован. После первичного контакта с аллергеном такое состояние формируется через 7-14 сут. и сохраняется годами.

Реакции гиперчувствительности II типа – цитоксический тип. Образующиеся антитела (обычно IgG или IgM) связывают чужеродные антигены, фиксированные на клетках индивидуума. Формирование иммунных комплексов на поверхности активирует систему комплемента, что ведет к формированию МАК и стимулирует фагоцитарные реакции.

Клинически проявляются поражениями крови (иммунные цитопении), поражении легких и почек при синдроме Гудпасчера, острыми отторжениями транстплантантов, гемолитической болезнью новорожденных.

Реакции гиперчувствительности III типа – иммунокомплексный тип. Данные реакции обусловлены образованием иммунных комплексов, фиксирующихся в тканях и вызывающих их повреждение. В норме такие комплексы Аг-Ат элиминируются фагоцитами. Иногда при высоких концентрациях иммунных комплексов они задерживаются в тканях (часто не имеющих отношения к источнику антигена) и запускают местные и системные воспалительные реакции. Связывая и активируя компоненты системы комплемента, они привлекают фагоциты. Последние не способны поглощать такие большие структуры и выделяют протеолитические ферменты и другие медиаторы воспаления, повреждающие ткани, в которых фиксирован комплекс.

Клинические примеры: сывороточная болезнь, экзогенный аллергический альвеолит (комплексы фиксируются в легочных капиллярах), системная красная волчанка, ревматоидный артрит (комплексы фиксируются в синовиальных оболочках суставов), васкулиты (комплексы фиксируются в эндотелии кровеносных сосудов), гломерулонефрит (комплексы фиксируются в фильтрующем аппарате почек).

Реакции гиперчувствительности IV типа – гиперчувствительность замедленного типа. Обусловлена клеточными иммунными реакциями. Развиваются не ранее чем через 24-48ч после повторного введения антигена. Развитие ГЧЗТ индуцируют продукты микроорганизмов, гельминтов, природные и искусственные антигены и гаптены (лекарства, косметика).

Классические примеры – туберкулиновая проба и контактный дерматит.

Распознавание антигена связанного с белками организма, иммунокомпетентными клетками вызывает активацию Т-хелперов, что приводит к пролиферации Т-киллеров ГЧЗТ. Сенсибилизированные Т-киллеры секретируют цитокины, привлекают другие лимфоциты и макрофаги в очаг. На более поздних этапах в реакцию включаются полиморфно-ядерные фагоциты, стимулирующие воспалительный ответ.

Гаптены приобретают способность инициировать реакции ГЧЗТ после взаимодействия с белками. Белки же вызывают ГЧЗТ при длительной иммунизации малыми дозами в сочетании с адъювантами. Многие низкомолекулярные органические и неорганические вещества (напр., хром), связываясь с белками кожи, выполняют роль гаптенов и сенсибилизируют организм при длительном контакте. В результате развивается контактный дерматит.

Способность отвечать развитием ГЧЗТ на различные микробные продукты (напр., антигены возбудителей туберкулеза, бруцеллеза) применяют при постановке проб для диагностики инфекционного процесса или установления возможного контакта организма с возбудителем.
перейти в каталог файлов
связь с админом