Главная страница
qrcode

Ответы по биохимии. 1. липиды. Биол. Роль. Классификация


Название1. липиды. Биол. Роль. Классификация
АнкорОтветы по биохимии.docx
Дата18.10.2017
Размер0.51 Mb.
Формат файлаdocx
Имя файлаОтветы по биохимии.docx
ТипДокументы
#28270
страница5 из 5
Каталог
1   2   3   4   5

49 определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом. Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В 1-ю пр-ку нал-ют сыворотку крови, а в другую р-р хлорида натрия. В обе про-ки приливают биуретовый реактив и перемешивают, избегая образования пены, через 30 мин фотометрируют в кювертах при зеленом светофильтре. Определив экстинкцию исследуемого р-ра, находят по графику, какой концентрации белка она соответствует.

50 определение кол-ва креатинина в моче. Клинико-диагност значение. Креатининяв-ся одним из конечных продуктов азотистого обмена и нормальной составной частью мочи. ПРИНЦИП МЕТОДА: креатинин при взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде образует окрашенные соединения, интенсивность окраски которых пропорциональна конц. креатинина в моче. ХОД: в цилиндр наливают мочу и прибавляют р-р щелочи и насыщенный р-р пикриновой кислоты. Одновременно ставят один контроль с водой, наливая в цилиндр дистил воды и все реактивы, как и с мочой. Взбалтывают и доводят дистил водой до объема 10 мл.фотометрируют против контроля на ФЭЛК с зеленым светофильтром в кювете и находят показание оптической плотности. По готовому калибровочному графику определяют количество креатинина в 0,1 мл мочи и подсчитывают содержание его в моче, выделенной за сутки. КЛИНИКО-ДИАГНОС ЗНАЧ-Е: повышенное выделение креатинина с мочой набл-ся при приеме мясной пищи, размозжении мягких тканей, синдроме длительного раздавливания, тяжелой мышечной работе, лихорадочных состояниях. Пониженное содержание креатинина отмечается при хроническом нефрите с уремией, мышечной атрофии, дегенерации почек, лейкемии, в старческом возрасте.

51 определение кол-ва мочевины в сыворотке крови, клин-диагносзн-е. в норме в сыворотке крови сод-ся мочевины 3,33-8,32 ммоль/л. Примерно 50% небелкового остаточного азота крови приходится на долю мочевины. ПРИНЦИП МЕТОДА: мочевина образует с диатцетилмонооксидом при наличии тиосемиварбазида и солей железа в сильнокислой среде при нагревании комплекс красного цвета. Интенсивность окраски зависит от конц мочевины в крови. ХОД: в центрифужнуюпро-ку берут воду и доб-ют сыворотку крови и р-р трихлоруксусной к-ты и перем-ют. Одновр-но в обычной про-ке готовят пробу со стандартным р-ом мочевины вместо сыворотки. Через 15 мин про-ку с сывороткой центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Затем в одну пр-ку вносят надосадочную жидкость, а в другую станд р-р мочевины. И в каждую приливают цветной реактив, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 20 мин. Затем охлаждают под водой. Фотометрируют при зеленой светофильтре. Х=Еоп/Ест х 100. КЛИН-ДИАГ ЗН-Е: снижение кону мочевины отмечается при паренхиматозном гепатите, циррозе, во время беременности и эклампсии. Повешение может наблюдаться при нефритах, лихорадочных состояниях, сепсисе, туберкулёзе почек и тд.

52 качественные реакции подтверждающие белковую природу инсулина. 1- биуретовая реакция. К 1 мл р-ра инсулина доб-ют 5-6 кап р-ра гидроксида натрия и 1-2 капли р-ра сульфата меди и перемешивают. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет. 2- реакция Миллона. К 5-10 кап р-ра инсулина доб-ют 2-3 капли реактива Миллона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета. 3-реакция Фоля. К 5-10 каплям р-ра инсулина доб-ют 2-3мл р-раNAOН и кипятят 10 мин на малень пламени горелки. После охлаждения доб-ют 1-2 капли р-раPb(ONa)2, появ-ся бурое окрашивание.

53 обнаружение йода в препарате щитовидной железы. При щелочном гидролизе тироксина образ-ся йодид калия, из которого йод вытесняется йодатом калия. Выделившейся свободный йод дает с крахмалом синее окрашивание. ХОД: в ступке растирают таблетку тиреодина и порошок высыпают в про-ку для гидролиза и заливают р-ом K2CO3. Перемешивают и закрывают пробкой с обратным холодильником и ставят на песчаную баню. Содержимое кипятят 10-15 мин. Полученный гидролизат охлаждают и нейтрализуют р-ом серной к-ты, затем доб-ют 1 кап р-ра крахмала и 1-2 капли р-раKIO3. Образуется синее окрашивание.

54 открытие наличия адреналина. Адреналин обладает слабощелочной реакцией, легко окисляется на воздухе с образованием адренохрома, вследствие чего р-р окрашивается в красный цвет. При взаимодействии с нитритом набл-ся желто-оранжевое окрашивание, с диазореактивом- красное, с хлорным железом-зеленое. Реакция с хлорным железом харак-на для пирокатехинового кольца, входящего в молекулу адреналина и норадреналина. ХОД: в про-ку нал-ют р-р адреналина и доб-ют 1 каплю хлорного железа. Набл-ся зеленое окрашивание. После добавления едкого натра набл-сявишнего-красное окрашивание.

55 качественные реакции на фолликулин. Качественная реакция на фолликулин проводится с конц серной кислотой и обусловлена образованием эфирного соединения соломенно-желтого цвета с зеленой флюоресценцией. ХОД: 1. В пр-ку нал-ют спиртовой р-р фолликулина и помещают в кипящую водяную баню для удаления спирта. Затем доб-ют конц серную кислоту и ставят обратно в водяную баню. Жидкость постепенно приобретает соломенно-желтое окрашивание, переходящее при нагревании в оранжевое.

56 качественные реакции подтверждающие белковую природу инсулина. 1- биуретовая реакция. К 1 мл р-ра инсулина доб-ют 5-6 кап р-ра гидроксида натрия и 1-2 капли р-ра сульфата меди и перемешивают. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет. 2- реакция Миллона. К 5-10 кап р-ра инсулина доб-ют 2-3 капли реактива Миллона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета. 3-реакция Фоля. К 5-10 каплям р-ра инсулина доб-ют 2-3мл р-раNAOН и кипятят 10 мин на малень пламени горелки. После охлаждения доб-ют 1-2 капли р-раPb(ONa)2, появ-ся бурое окрашивание.

59 исследование физико-химических свойств мочи: относит плотность, цвет, прозрачность, рН. Фосфаты, сульфаты. 1- плотность мочи. Относительная плотность зависит от кол-ва растворимых веществ в моче. Обычно составляет 1,017-1,020. ХОД: в небольшой цилиндр наливают мочу и осторожно погружают в нее урометр. Производят отсчет, беря ту линию на шкале урометра, которая соответствует нижнему мениску жидкости. В случае большой относительной плотности берут второй тип урометра. 2- определение рН мочи. На середину индикаторной бумаги наносят 1-2 капли исследуемой мочи и по изменению цвета одной из окрашенных полосок, совпадающему с окраской контрольной полосы, устанавливают Рн мочи. 3-цвет. В норме свежая моча имеет соломенно-желтый цвет.

60 определение наличия в моче белка. Белок в нормальной моче находится в виде следов, которые не открываются обычными реакциями. Но при ряде заболеваний с мочой начинают выделятьсязаметноеколич-во белков. Для обнаружения белка в моче применяют реакции осаждения с помощью азотной и сульфосалициловой кислот. ХОД: реакции проводится одновременно с исследованием нормальной мочи. К моче приливают 20% сульфосалициловую кислоту. При наличии белка в моче образуется белый осадок, количество которого зависит от конц белка в моче.

61 количественное определение непрямого билирубина в сыворотке крови. Клин-диагнзн-е. в сыворотке крови имеетются 2 вида билирубина: непрямой и прямой. Непрямой токсичен для организма, нерастворим в воде, не проходит через почечный фильтр и не выделяется желчью и мочой.Диазореактив дает с прямым билирубином розовое окрашивание. Интенсивность окраски зависит от конц прямого билирубина . непрямой билирубин можно перевести в растворимое состояние добавлением к сыворотке кофейного реактива, который повышает растворимость этого пигмента, и определить с помощью диазореакции. Общее содержание обеих форм билирубина сыворотки составляет общий билирубин. По разнице между количеством общего прямого билирубина определяют уровень непрямого билирубина

.63 обнаружение желчных пигментов в моче. Желчные пигменты- билирубин, биливердин и др появляются в моче обычно в виде щелочных солей при желтухе.Моча, содержащая желчныепегменты имеет желтовато-коричневый или зеленый цвет. ХОД: 1 С реактивом Фуше. Метод основан на окислении билирубина хлоридом железа, входящим в состав реактива Фуше, после осаждения его хлоридом бария. В пр-ку наливают мочу и прибавляют р-р хлорида бария, перемешивают, фильтруют смесь. Вынутый из воронки фильтр раскладывают на сухой фильтровальной бумаге. На осадок наносят 1-2 капли р-раФуше. В присутствии билирубина на фильтре появляются сине-зеленые и голубоваты пятна. 2-с раствором йода. Метод основан на окислении билирубина в биливердин под действием йода. В пр-ку наливают мочу и осторожно наслаивают спиртовой р-р йода. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо. С нормальной мочой проба отрицательна.

64 обнаружение кетоновых тел в моче. Кетоновые тела появляются в моче при нарушениях углеводного и жирового обмена. В частности при диабете и голодании. ХОД: 1-Люголя на ацетон. К моче прибавляют р-р нитропрусида натрия и р-р гидроксида натрия появ-ся красно-бурое окрашивание. При подкислении конц уксусной кислотой окрашивание становится ярко-красным. 2- проба Либена на ацетон. К моче прибавляют р-р гидроксида натрия и затем по каплям р-р Люголя до слабо-желтой окраски р-ра. При наличии ацетона в моче жидкость мутнеет и обладает характерным запахом. 3- проба Герхарда на ацетоуксусную кислоту. К моче прибавляют по каплям р-р хлорида железа, выпадает осадок фосфатов в форме FePO4. При наличии ацетоуксусной кислоты от добавления лишней капли хлорида железа появляется винно-красное окрашивание, постепенно бледнеющее при стоянии.

65 обнаружение глюкозы в моче. В норме в моче содер-ся 0,2-0,4 г/л глюкозы и она не обнаруживается обычными реакциями. Обычно повышение глюкозы в моче наблюдается при повышении концентрации сахара в крови. ХОД: во взятую натощак свеженабранную мочу погружают полоску глюкотеста та , чтобы желтая полоска, имеющаяся на полоске, была полностью смочена. Быстро извлекают бумажку из мочи, кладут смоченным концом на пластмассовую пластинку и выдерживают в таком положении около 2 мин. В случае присутствии глюкозы в моче желтая полоска окрашивается в различные цвета в зависимости от конц глюкозы.

66 обнаружение 17-кетостероидов в моче. Клин-диагзн-е. метод основан на взаимодействии 17-кетостероидов с м-динитробензолом в щелочной среде с образованием продуктов конденсации розово-фиолетового цвета. ХОД: в пробирку внося 20 кап мочи и прибавляют по стенке р-ор м-динитробензола. Затем так же по стенке добавляют р-р гидроксида натрия. Верхний слой жидкости окрашивается в розово- фиолетовый цвет.

68 обнаружение ацетона в моче. ХОД: 1-Люголя на ацетон. К моче прибавляют р-р нитропрусида натрия и р-р гидроксида натрия появ-ся красно-бурое окрашивание. При подкислении конц уксусной кислотой окрашивание становится ярко-красным. 2- проба Либена на ацетон. К моче прибавляют р-р гидроксида натрия и затем по каплям р-р Люголя до слабо-желтой окраски р-ра. При наличии ацетона в моче жидкость мутнеет и обладает характерным запахом.

70 определение общего билирубина в сыворотке крови. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада гемоглобина в клетках ретикуло- эндотелиальной системы. ХОД: готовят 2 про-ки. В опытную помещают кофейный реактив и диазосмесь, а в контрольную сыворотку крови, кофейный реактив, дистил.воду и диазосмесь. Содержимое обеих пробирок хорошо перемешивают и ставят в темноту на 20 минут, затем колориметрируют на ФЭК с зеленым светофильтром против контроля. Если в пробах развивается слабая окраска, то доб-ют по 3 кап ра-ра гидроксида натрия. При этом цвет р-ра переходит в зеленый, а при большой концентрации билирубина в синий, часто наблюдается исчезновение мути. Расчет производят по калибровочному графику.
1   2   3   4   5

перейти в каталог файлов


связь с админом