Главная страница
qrcode

БИОХИМИЯ ПОЧЕК И МОЧИ. Учебное пособие для самостоятельной работы студентов Оренбург 2014 2 I. Биохимия почек. Функции почек. Механизм образования мочи


Скачать 442.85 Kb.
НазваниеУчебное пособие для самостоятельной работы студентов Оренбург 2014 2 I. Биохимия почек. Функции почек. Механизм образования мочи
АнкорБИОХИМИЯ ПОЧЕК И МОЧИ.pdf
Дата14.07.2018
Размер442.85 Kb.
Формат файлаpdf
Имя файлаBIOKhIMIYa_POChEK_I_MOChI.pdf
оригинальный pdf просмотр
ТипУчебное пособие
#43005
страница3 из 3
Каталог
1   2   3
. Индолу здорового взрослого человека в моче отсутствует, положительная индолурия наблюдается при нарушении обезвреживающей функции печени.
8. Индикан в норме выделяется с мочой в небольших количествах, которые не определяются обычными лабораторными методами. Положительная индиканурия наблюдается при усиленном гниении белков в

19 толстом кишечнике (запоры, большое поступление белка с пищей, рак прямой кишки. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА МОЧИ Обоснование темы Биохимический анализ мочи даёт представление о функциональном состоянии почек, процессах обмена веществ в различных органах и организме в целом, способствует выяснению характера патологического процесса, установлению патогенеза и прогноза заболевания, позволяет судить об эффективности проводимого лечения. При заболеваниях, связанных с нарушением деятельности почек и других органов пищеварительного тракта, сердца, легких, печени, эндокринных желез, при нарушении обмена веществ и авитаминозах отмечается изменение химического состава крови, что в свою очередь, отражается на составе мочи и ее физико-химических свойствах.
В моче может нарушиться соотношение ее нормальных составных частей и, кроме того, могут появиться вещества, которые у здорового человека не открываются обычными реакциями (патологические компоненты. Отсюда следует, что качественный и количественный анализ состава мочи имеет в клинической практике важное диагностическое и прогностическое значение, а также зачастую служит критерием эффективности лечебных мероприятий.
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МОЧИ
1. Определение цвета
Вчистую пробирку наливают 2-3 мл мочи и рассматривают ее на свету.
2. Определение прозрачности
В той же пробирке ведут определение прозрачности мочи.
3. Определение запаха
Склянку с мочой держат на некотором расстоянии относа и движением ладони руки направляют воздух к носу. При этом ощущается тот или иной запах.
4. Определение реакции мочи
Принцип метода
Определение реакции мочи можно провести при помощи синей и красной лакмусовой бумаги одновременно. Синяя лакмусовая бумага краснеет, красная не изменяет своего цвета – моча имеет кислую реакцию.
Красная лакмусовая бумага синеет, синяя не изменяет своего цвета – моча имеет щелочную реакцию.
Оба вида бумаги не меняют своего цвета – моча имеет нейтральную реакцию. ХОД РАБОТЫ Полоску синей или красной лакмусовой бумаги опускают в мочу на 1 – 2 секунды. По полученной окраске судят о реакции среды (кислой, щелочной или нейтральной.
5. Определение рН мочи

20 Принцип метода Реактивная зона полоски
– кислотно-щелочной индикатор бромтимоловый синий, который может менять цвет от оранжевого через желтый и зеленый до синего при изменении рН в диапазоне 5-9. При сравнении полоски с цветом индикаторной шкалы значения рН пробы можно определить с точностью до 0,5 единиц рН. Результаты могут быть смещены, как в кислую, таки в щелочную сторону, присутствующими в моче посторонними веществами. Оценка теста Цвет реактивной зоны полоски меняется в зависимости от рН исследуемой мочи. Цвет реактивной зоны сопоставляется с цветной шкалой сразу же после извлечения полоски из пробы. Цвет отдельных квадратов шкалы соответствует значениям рН 5-6-7-8. Если цвет реактивной зоны оказывается между двумя цветными квадратами, то результаты могут быть приведены к целым значениям или к промежуточным значениям с диапазоном 0,5 единиц. ХОД РАБОТЫ
На середину универсальной индикаторной бумаги наносят 1-2 капли исследуемой мочи. Окрашенную полоску сравнивают с эталоном, устанавливают рН исследуемой мочи. В норме при употреблении смешанной пищи рН мочи 5,5-6,5.
6. Определение относительной плотности мочи (удельный вес)
Принцип метода
Относительная плотность мочи составляет в норме 1,015-1,025 г/см
3
Определение относительной плотности мочи производят с помощью специальных ареометров небольшого размера, называемых урометрами.
Урометры бывают двух типов первый - для мочи с низкой и нормальной относительной плотностью (с делениями от 1,000 до 1,030 г/см
3
), второй - для мочи с высокой относительной плотностью (с делениями от 1,030 до
1,060 г/см
3
). ХОД РАБОТЫ
В небольшой цилиндр с таким диаметром, чтобы урометр свободно плавал в нем, наливают по стенке исследуемую мочу и осторожно погружают в нее урометр. Производят отсчет, беря ту линию на шкале урометра, которая соответствует нижнему мениску жидкости. Все определения производят при температуре 20 С, поскольку шкала урометра проградуирована в соответствии с этой температурой. Если моча имеет другую температуру, тона каждые 3 С свыше этой температуры нужно прибавить, а на каждые 3 С ниже – убавить по 0,001 от показания шкалы урометра. Обнаружение патологических компонентов мочи


21
1. Качественные реакции на обнаружение белка в моче – а) проба Геллера сконцентрированной азотной кислотой Принцип метода
Концентрированная минеральная кислота
НNO
3
вызывает денатурацию белка и образует комплексные соли белка с кислотой. На границе двух слоев жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца. ХОД РАБОТЫ В пробирку наливают 1 мл концентрированной Н, наклоняют пробирку под углом 45 0
и осторожно по стенке пипеткой наслаивают мл мочи. б) проба сконцентрированной сульфосалициловой кислотой Принцип метода
Концентрированная органическая сульфосалициловая кислота вызывает денатурацию белка. Выпадение белка в виде осадка или мути связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами. ХОД РАБОТЫ К 1 мл мочи приливают 3 капли 20% сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок.
2. Количественное определение белка в моче с помощью тест – полоски «Альбуфан». Принцип метода Тест основан на принципе белковой ошибки индикатора. Реактивная зона содержит кислородный буфер и специальный индикатор, который в присутствии белков меняет цвет с желтого через зеленый до синего. Тест высокочувствителен к альбумину и реагирует на его присутствие в моче при концентрации 0,10-0,15 гл. Высокомолекулярные белки, такие как иммуноглобулины, измеряются с меньшей чувствительностью, чем альбумины. Низкомолекулярные белки, такие как бета микроглобулин, белок Бенс -Джонса практически не выявляется этим тестом. Оценка теста положительным тест считается в том случае, если меняется цвет реактивной зоны. В зависимости от концентрации альбумина в моче реактивная зона может приобретать оттенок от зеленого до синего. Эти оттенки сравниваются с цветной шкалой, зоны которой соответствуют концентрации белка 0,3, 1, 3, 10 гл. ХОД РАБОТЫ
Тест-полоску, не касаясь реактивной зоны руками, опустить на 1-2 секунды в исследуемую мочу так, чтобы зона была смочена. Затем удалить излишки мочи с полоски и приблизительно через 1 минуту сравнить окраску зоны индикации с цветной шкалой на наборе и определить количество белка, которое выражено в гл.
3. Качественные реакции на глюкозу в моче
а) проба Фелинга б) проба Ниландера

22
Принцип метода Реакции основаны на восстановительных свойствах глюкозы, которая в щелочной среде при нагревании, окисляясь, восстанавливает металл (в пробе
Фелинга до СО - красный цвет, в пробе Ниландера до свободного Bi - черный цвет. Химизм реакции Фелинга
:
С
6
Н
12
О
6
+ 2CuSO
4
+ 5 КОН t

С
5
Н
11
СООК +2 К + НО +CuOH ↓ Глюкоза (желтый осадок)

НО ↓
(красный осадок) Химизм реакции Ниландера
:
3 С
6
Н
12
О
6
+2 ОКОН С
5
Н
11
СООК +2 Bi

+ 2 КО + 6 НО Глюкоза (черный цвет) ХОД РАБОТЫ Проба Фелинга: К I мл исследуемой мочи приливают 0,5 мл реактива Фелинга, нагревают пробирку до кипения. В случае положительной реакции на глюкозу наблюдается красное окрашивание вследствие образования оксида меди С. Проба Ниландера К I мл исследуемого раствора (мочи) приливают 0,5 мл реактива Ниландера, нагревают пробирку до кипения и кипятят 2 минуты, в случае положительной реакции на глюкозу наблюдается выпадение черного осадка, вследствие образования свободного Bi. Количественное определение глюкозы в моче с помощью тест-полосок
«Глюкотест», «Глюкофан». Принцип метода
Определение основано на специфической энзиматической реакции с использованием ферментов глюкозоксидазы и пероксидазы. Окисление глюкозы атмосферным кислородом катализируется ферментом глюкозооксидазой. При этом образуется глюконолактон и НО. Пероксид водорода в последующей реакции, катализируемой ферментом пероксидазой, окисляет хромогенную систему с образованием интенсивно окрашенных продуктов реакции.
Тест реагирует появлением интенсивного красно-коричневого окрашивания на концентрацию глюкозы 2 ммоль/л и выше. Концентрация 1,7 ммоль/л впервой утренней порции мочи принята за верхний предел физиологической глюкозурии. Тест специфичен для глюкозы.
Оценка теста тест считается положительным при изменении цвета реактивной зоны. В зависимости от концентрации глюкозы в пробе исходная желтая окраска реактивной зоны меняется на красновато-коричневую или коричнево-красную. Отдельные зоны окраски соответствуют следующим концентрациям менее 2, 6, 17, 56, более 170 ммоль/л. ХОД РАБОТЫ

23 Полоску бумаги «Глюкофан» погружают в исследуемую мочу, затем высушивают на воздухе и через минуту сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой.
5. Качественная реакция на кровь - бензидиновая проба Принцип метода Основан на слабой пероксидазной активности гемоглобина, который в кислой среде разлагает перекись водорода доводы и атомарного кислорода, который окисляет органическое вещество бензидин с образованием продуктов окисления желто-зеленого цвета. ХОД РАБОТЫ В пробирку наливают 0,5 мл мочи и приливают к ней последовательно 0,2 мл 30% уксусной кислоты, 0,5 мл 5% спиртового раствора амидопирина и 0,2 мл 3% раствора перекиси водорода. Перемешивают, и при наличии крови в течение 5 минут появляется сине-фиолетовое окрашивание, которое затем исчезает.
6. Качественные реакции на кетоновые тела в моче а) проба Легаля Принцип метода Метод основан на способности ацетона и ацетоацетата в щелочной среде образовывать с нитропруссидом натрия комплексы оранжево-красного цвета, превращающиеся при подкислении раствора в соединения вишнево-красного цвета. Проба более чувствительна к ацетоуксусной кислоте, чем к ацетону, с

-оксибутиратом реакция не идет. ХОД РАБОТЫ В пробирку вносят 0,5 мл мочи, добавляют 0,1 мл нитропруссида натрия и
0,2 мл раствора гидроксида натрия, появляется оранжево-красное окрашивание. Вносят в пробирку 0,5 мл концентрированной уксусной кислоты. При наличии ацетоновых тел появляется вишнево-красное окрашивание. Если ацетон отсутствует, то при подкислении окрашивание переходит в желтое. б) проба Либена Принцип метода Метод основан на способности ацетона в щелочной среде образовывать желтый осадок йодоформа, обладающего специфическим запахом. ХОД РАБОТЫ В пробирку вносят 1 мл мочи, добавляют 0,1 мл раствора гидроксида натрия и затем 0,1 мл раствора Люголя до слабо-желтой окраски раствора. При наличии ацетона жидкость мутнеет вследствие выделения бледно- желтого осадка йодоформа, обладающего характерным запахом.
7. Количественное определение кетоновых тел в моче с помощью тест- полосок «Кетофан»
Принцип метода

24
Тест основан на реакции Легаля. Реактивная зона содержит щелочной буфер и нитропруссид натрия, который вступает в реакцию с ацетоацетатом или ацетоном, следствием чего является образование продукта, окрашенного в фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству кетоновых тел в пробе. Тест чувствителен к ацетоацетату, реагирует на его присутствие в моче в концентрации 0,3-0,5 ммоль/л. Тест менее чувствителен к ацетону и нечувствителен к β-оксибутирату. ХОД РАБОТЫ Из пенала упаковки берут полоску, не прикасаясь руками к зонам индикации. Опускают полоску на 1-2 секунды в исследуемую жидкость, лишнюю жидкость удаляют, проводя полоской по краю сосуда, и через 1 минуту сравнивают со шкалой, находящейся на этикетке упаковки.
8. Качественная реакция на желчные пигменты - проба Гмелина сконцентрированной азотной кислотой Принцип метода Билирубин в моче при взаимодействии сконцентрированной окисляется. На границе раздела жидкостей (кислота–моча) появляются продукты окисления в виде окрашенных колец биливердин- зеленое, билицианин – синее, холетелины – от красного до желтого. ХОД РАБОТЫ К мл мочи подслаивают 1 мл концентрированной азотной кислоты, так, чтобы жидкости не смешивались. На границе раздела двух сред при наличии билирубина появляются цветные кольца.
9. Количественное определение уробилиногена в моче с помощью тест- полосок «УБГфан»
Принцип метода В основе реакции азосочетания стабилизированной диазониевой соли с уробилиногеном в кислой среде. Реактивная зона меняет цвет в присутствии уробилиногена на розовый или красный. Тест специфичен для всех уробилиногеновых тел. Чувствительность 3-4 мг/л (5,1 – 6,8 мкмоль/л).
Оценка теста положительным считается тест при изменении цвета тест- зоны в течение первых 60 секунд. Эта окраска визуально сравнивается со шкалой, отдельные цвета которой соответствуют следующим концентрациям уробилиногена: 17 – 51 – 102 – 203 мкмоль/л. ХОД РАБОТЫ Тест - полоску погружают в исследуемую мочу, затем высушивают на воздухе и сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой.

25 Оформление протокола анализа мочи Визуальный осмотр
1. Цвет -
2. Запах -
3. Прозрачность -
4. Осадок - Качественный анализ мочи
1. Реакция среды -
2. рН среды -
3. Относительная плотность -
4. Определение мутности - Обнаружение патологических компонентов мочи Реакции на белок Проба Геллера Проба с сульфосалициловой кислотой Реакции на глюкозу Проба Фелинга Проба Ниландера Реакции на кетоновые тела Проба Либена Проба Легаля
4. Реакция на кровь -
5. Реакция на желчные пигменты – Количественное определение патологических компонентов мочи с помощью диагностических тест - полосок
1. Содержание белка в моче -
2. Содержание глюкозы в моче -
3. Количество кетоновых тел в моче-
4. Содержание уробилиногена в моче- ВЫВОД

26 Выучить константы Физические свойства мочи Количество мочи в сутки (диурез)
1200-1500 мл Относительная плотность
1,015-1,025 г/см
3 Максимальная осмотическая концентрация
910 мосм/л Цвет соломенно-желтый Прозрачность прозрачная Запах специфический, нерезкий Химический состав мочи Реакция мочи нейтральная или слабокислая Реакция на белок Отрицательная Реакция на желчные пигменты Отрицательная Реакция на кетоновые тела Отрицательная Реакция на глюкозу Отрицательная Реакция на кровь Отрицательная Реакция на индикан Отрицательная Реакция на уробилирубиноген отрицательная Общий азот мочи
10-16 г/сут Мочевина
20-35 г/сут (333-583 ммоль/сут) Мочевая кислота
270-600 мг/сут
(1,6-3,54 ммоль/сут) Аммиак
0,6-1,3 г/сут
Креатинин
0,5-2 г/сут (4,4-17,7 ммоль/сут) Креатин Отсутствует Калий
1,5-3 г/сут Натрий
3-6 г/сут Хлор
120-170 ммоль/сут Фосфор неорганический
0,6-1,2 г/сут
1   2   3

перейти в каталог файлов


связь с админом